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就開鑿運河一事進行過磋商，當時無果而終，這次新格拉納達舊事重提，美國自然樂於接受。1846年12月12日，經過歷時一年的談判，美國與新格拉納達締結了《美國、新格拉納達和平、友好、航海及通商條約》，也稱《彼得拉克－馬利亞里諾條約》，條約共36條，有效期為20年，其中第35條規定美國獲得以下權利：
美國公民、船隻、商品在其境內可以享有新格拉納達公民所能享有的種種權利（全部免稅、特權和豁免），透過巴拿馬地峽的美國旅客、郵件和商品也應給予同等優惠，將來在巴拿馬修建任何jiā通設施時，其通行權或過境權應對美國政fǔ和公民自由開放，新格拉納達政fǔ不得向美國公民徵收高於新格拉納達公民的通行費用，對美國商品也不得徵收進口稅。
在此基礎上，美國政fǔ也對新格拉納達作出三項承諾：
1、保證巴拿馬地峽地帶的完全中立；
2、保證未來運河的自由通行在任何時候都不會被中斷或受到阻礙；
3、保證新格拉納達政fǔ擁有巴拿馬地峽的主權和財產權。
而考慮到新格拉納達政局動盪，為防意外，美國人也還留了幾手。1848年美墨戰爭結束後，美國與墨西哥簽訂《瓜達盧佩－伊達爾哥條約》，掌握了在特萬特佩克地峽開鑿運河的權力，1849年，又與尼加拉瓜簽訂《斯夸爾條約》，取得了開鑿尼加拉瓜運河的特權。
到了1849年，加利福尼亞發現金礦，經濟飛速發展，運河的開鑿更是日益受到各方關注，羽翼未豐的美國預見到實力雄厚的英國可能會參與開鑿運河的爭奪，於是未雨綢繆，搶先向英國提出未來巴拿馬運河中立化的建議，得到英國熱烈響應。
之後，1850年4月19日，美國國務卿約翰。克萊頓與英國全權代表亨利。布林沃在華盛頓簽訂了《美國和英國關於連線大西洋和太平洋的通航運河的條約》，規定：美國和英國均不得對前述通航運河為自己取得或維持任何排他性的控制，同意任何一方均不得在該運河的要衝地區或附近建立或維持任何要塞，也不得對中美洲的任何部分實施佔領和統治。條約承諾，當締約雙方發生戰爭時，任何一方也不能向對方封鎖運河，美、英兩國共同負責保護任何一方修建運河工程的財產不受侵犯，運河完工時，雙方將保護它，使其不受阻礙、劫奪或不公允的沒收，雙方共同保證運河的中立，以使該運河永久自由開放，所投入的資本穩固可靠。透過這一條約，美國排除了英國以武力獨佔運河的危險。
然而，《克萊頓－布林沃條約》是一個充滿妥協和折衷的外jiā檔案，存在許多漏dòng，它雖然使未來的巴拿馬運河中立化，但文字含糊不清、模稜兩可，執行中存在極大的爭議。1850年，美國耗資750萬美元在巴拿馬地峽修建連線兩大洋的鐵路，歷時五年完工，1849年，一家美國公司準備開鑿以格雷敦為終點的橫貫尼加拉瓜的運河時，英國人援引《克萊頓－布林沃條約》，指責美國侵犯了受英國保護的印第安人莫斯基託王國的合法權益，致使工程下馬，這個挫折讓美國人認識到在巴拿馬地峽開鑿運河才是一個最合算的選擇。但是，美國和新格拉納達的關係越來越差。
按照美國與新格拉納達簽訂的條約，從1846年起，美國公民獲得穿過巴拿馬地峽的權力。於是，á水般湧來的美國遊客帶來了美元，但在對北方強鄰懷有恐懼的巴拿馬人看來，這種經濟上的輸血卻幾近侵略，1856年更是發生了一起流血事件：當年4月15日，一名美國人在巴拿馬火車站購買西瓜時與攤主發生糾紛，拒付貨款，雙方遂起爭端，由於圍觀的巴拿馬人和美國人情緒jī動，衝突很快演變成一場持續數小時的槍戰。作客的美國人自然難討便宜，死傷31人，巴拿馬方面傷亡15人。
事件發生後，美國的特派全權專使警告新格拉納達政fǔ：如果拒絕迅速賠償損失，美國將立即佔領巴拿馬地峽。對此，新格拉納達總統的回答很簡單，但卻形象地反映了弱小民族的微妙心態：硬要使任何一個地峽的過客有權向我們的公民開槍，而我們的公民必須逆來順受，這是極不公平的，也是橫行霸道的，容忍這種屈辱的民族是不配生存的
然而，愛國的衝動和jī情的表白無法掩飾國家的虛弱。7月，2艘美國巡洋艦“獨立”號和“聖瑪麗”“號駛抵巴拿馬，9月19日，160名美國海軍陸戰隊員登陸，佔領了巴拿馬火車站，這才讓jī動的新格瑞那達政fǔ平靜下來。
1857年2月，兩國開始談
