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在大澤鄉起義，各地紛紛響應。當年九月，會稽代郡守殷通因賞識項梁，便同他商議反秦事宜。項梁假意迎合，請求派侄子項羽找來桓楚共同起事，殷通同意。項梁攜項羽再次會見殷通，在聽到項梁暗示後項羽將殷通斬殺，之後項梁攜殷通頭顱及印綬出門，並讓項羽殺死擾亂者。項梁召集豪傑，表明反秦事宜，在吳縣舉兵起事，聚眾八千人，項梁自任會稽郡守，以項羽為裨將，將當地豪傑任命為各級軍職，征討周邊各縣。
擴充勢力：陳勝部將召平聽聞秦軍將至，為拉攏項梁，假傳陳勝命令封項梁為上柱國，並讓他帶兵西進攻秦。項梁率軍渡過長江向西前進，先後吞併陳嬰、英布、蒲將軍等勢力。他渡過淮河時，義軍黥布、蒲將軍各自率領部眾歸附，其軍隊擴充到六七萬人，屯駐下邳。
3. 反秦戰爭中的作為：
擊敗秦軍：項梁的軍隊與秦軍多次交戰，取得了不少勝利。前208年七月，項羽聽聞東阿情況緊急，率軍支援，同章邯軍數次交戰。同年八月，項梁在東阿大敗秦軍，派項羽、劉邦二人攻伐城陽，自己則親率軍隊追擊章邯，在定陶再次擊敗秦軍。
擁立楚王：聽聞陳勝已死，項梁召集部將共同商議。居鄛人范增建議擁立楚懷王之孫熊心，項梁贊同，將熊心擁立為帝，亦稱楚懷王，項梁則自號武信君。此外，項梁聽取張良的意見，立韓國宗室韓成為韓王，以張良為韓國司徒，率領千餘人攻韓國舊地。
4. 兵敗身死：
項梁在定陶同秦軍交戰並多次擊敗秦軍後，將領宋義勸說他現在軍隊處於將領驕傲、士兵懈怠的情況，而秦國士兵還在不斷增加，情況危急，但項梁對此不理。
同年九月，秦國調派援軍支援章邯，章邯趁夜率軍襲擊項梁，項梁兵敗身死。
